產(chǎn)品規(guī)格
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 售價(jià)(元) |
痕量樣本全蛋白組富集試劑盒 | PER01 | 24 T | 1200 |
PER02 | 96 T | 4800
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中，痕量樣本（如微量細(xì)胞、體液等）的全蛋白組分析常面臨低豐度蛋白檢出難、樣本需求量大的挑戰(zhàn)。本試劑盒采用自主研發(fā)的高效蛋白富集新材料，可在一管內(nèi)完成蛋白捕獲、裂解、烷基化、酶解等關(guān)鍵步驟，極大減少樣本損失和非特異性吸附，顯著提升痕量樣本的蛋白檢出率和質(zhì)譜分析靈敏度。適用于50–5000個(gè)細(xì)胞/μL的微量樣本處理，是珍貴樣本蛋白質(zhì)組學(xué)研究的理想選擇。
產(chǎn)品組成及保存條件
組分 | 組分名稱 | 24T規(guī)格 PER01 | 96T規(guī)格 PER02 | 主要功能 | 保存條件 |
組分A | Protein Enrichment reagent | 0.1 mL | 0.4 mL | 蛋白質(zhì)提取 | 4 ℃保存，有效期1年 |
組分B | Solution Buffer | 0.25 mL | 1 mL | 雜質(zhì)清洗 | 4°C保存，有效期1年 |
組分C | Lysis /Binding Buffer | 0.125 mL | 0.5 mL | 細(xì)胞裂解，烷基化 | -20 ℃保存，有效期1年，避免反復(fù)凍融 |
組分D | Trypsin | 0.05 mg/mL 0.05mL | 0.05 mg/mL 0.2mL | 蛋白質(zhì)酶解 | -20°C保存，有效期1年，避免反復(fù)凍融 |
使用方法
1，需自備試劑和耗材：
自備儀器與試劑 | 說明 |
低吸附移液器吸頭，0.5 mL無菌無酶EP管 | 減少提取過程中蛋白質(zhì)損失 |
恒溫混勻儀或其他等效設(shè)備 | 提供裂解、烷基化、蛋白質(zhì)富集、酶解等步驟的恒溫及震蕩條件 |
脫鹽槍頭，推薦使用Ziptip (Millpore) 脫鹽柱 | 肽段脫鹽 |
封口膜 | 減少加熱及酶解過程中蛋白質(zhì)損失 |
冷凍離心機(jī) | 蛋白質(zhì)提取 |
真空濃縮機(jī)或其他等效設(shè)備 | 脫鹽后肽段濃縮 |
1X磷酸鹽緩沖液(PBS) | 細(xì)胞稀釋 |
甲酸(FA) | 終止酶切 |
三氟乙酸(TFA)、乙腈(CAN)、質(zhì)譜水 | 肽段切除 |
2.操作步驟
(1) 樣本準(zhǔn)備：使用少量PBS將樣品稀釋至50-5000個(gè)細(xì)胞/μL。
(2) 細(xì)胞裂解：取5 μL組分C (Lysis /Binding buffer)加入到0.5 mL無菌無酶EP管中。取1 μL的細(xì)胞懸液加入裝有5 μL組分C (Lysis /Binding buffer)的管中，使用封口膜密封，95 ℃加熱30 min，取出管后瞬時(shí)離心使液體聚集在EP管底部。將EP管置于超聲儀內(nèi)，超聲處理60 min，使細(xì)胞完全裂解，核酸完全降解，取出管后瞬時(shí)離心使液體聚集在EP管底部。
注：加熱與酶解步驟請(qǐng)使用封口膜密封，超聲時(shí)置于冰水浴中，防止管體破裂。
(3) 烷基化：60 ℃加熱1 h，取出管后瞬時(shí)離心使液體聚集在EP管底部。
(4) 蛋白提?。杭尤? μL組分A (Protein Enrichment reagent)，使用低吸附槍頭吹打均勻，1000 rpm震蕩10 min以充分富集蛋白。然后在20000 g下離心10 min，棄上清。取8 μL組分B (Solution Buffer)重懸蛋白混合物，清洗雜質(zhì)。
注： 組分A Protein Enrichment reagent使用前請(qǐng)超聲并震蕩混勻。
(5) 蛋白酶解：加入2 μL組分D（胰蛋白酶Trypsin），37 ℃酶解12-16 h。酶解結(jié)束后加入終濃度為1 %的甲酸FA終止酶解反應(yīng)，并進(jìn)行超聲（＜5 min），接著在20000 g下離心10 min收集上清中的多肽。
(6) 脫鹽：①脫鹽柱處理：首先用脫鹽槍頭（Ziptip）吸取10 μL 100 % 乙腈活化Ziptip，棄去廢液，重復(fù)2次。接著吸取10 μL 0.1 % TFA清洗Ziptip，棄去廢液，重復(fù)2次。②加載樣本：使用Ziptip在樣品中反復(fù)吹吸7-10次使樣本全部加載到脫鹽柱中。③清洗脫鹽柱：吸取0.1 % TFA清洗槍頭，重復(fù)2次。④樣本洗脫：吸取10 μL 50 % 乙腈，收集樣本并在樣本中反復(fù)吹吸7-10次。⑤使用真空濃縮儀濃縮樣本后保存在-80 °C冰箱。
注意事項(xiàng)
1，為了您的自身安全，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)做好有效防護(hù)；
2，本試劑盒的保存，按照各組分的不同保存條件進(jìn)行保存；
3，本試劑盒的實(shí)驗(yàn)操作推薦使用低吸附耗材，減少蛋白損失；
4，本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)！