產(chǎn)品規(guī)格

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

外泌體是由活細(xì)胞分泌的具有生物活性的膜結(jié)構(gòu)物質(zhì)，直徑在50-150nm左右，并且不能自行復(fù)制的具有脂質(zhì)雙分子層的小囊泡。外泌體廣泛分布于細(xì)胞上清，血液，尿液，腦脊液，唾液，滑液，羊水，牛奶中，在植物與細(xì)菌中也有分布。外泌體含有多種蛋白質(zhì)、脂類、DNA和RNA等物質(zhì)，在細(xì)胞間通訊、物質(zhì)運(yùn)輸和免疫調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮著重要作用。

膜特異性外泌體富集試劑盒（細(xì)胞上清磁珠法）采用獨(dú)特的分離技術(shù)特異性識(shí)別外泌體的膜結(jié)構(gòu)，脂質(zhì)探針靶向捕獲外泌體，再通過與磁珠孵育從細(xì)胞上清中收集外泌體，快速從細(xì)胞上清中獲得大量完整的外泌體顆粒，清洗后獲得磁珠-外泌體的復(fù)合體，可直接裂解用于下游蛋白分析。

  本試劑盒專用于細(xì)胞上清液樣本，不適用于血清血漿，腦脊液，尿液等樣本。

產(chǎn)品組成及保存條件

注：脂質(zhì)探針和磁珠組分需要搖勻混合后再使用。

使用方法

需自備試劑和耗材：

（1）試劑： 1×PBS溶液

（2）裝置及耗材：① 4 °C搖床或者旋轉(zhuǎn)混勻儀；②磁力架；③離心機(jī)；④15 mL EP管；1.5 mL EP管

1.樣本預(yù)處理:

1)      取2 mL的細(xì)胞上清，800 g，常溫離心5 min；

2)      吸取離心后的上清，2000 g，常溫離心10 min；

3)      吸取離心后的上清，12000 g，4℃離心20 min；

4)      取上清于新的15 mL 離心管中，4℃?zhèn)溆谩?/span>

2.探針孵育:

以2 mL細(xì)胞上清為例，按照相應(yīng)比例加入相對(duì)應(yīng)的試劑用量。

注：此體系可純化2 mL的細(xì)胞上清液樣本，為最佳分離效率體系及比例，可以按比例增加細(xì)胞上清液處理量，但外泌體的分離效率略有下降。

1)      取4 mL的組分B脂質(zhì)探針稀釋劑于15 mL的離心管中，加入1.6 μL的組分A脂質(zhì)探針，震蕩混勻，即為AB混合液；

2)      將2 mL的細(xì)胞上清液加入組分A與組分B的混合液中，上下顛倒15次，4 ℃搖床（40 rpm左右）或旋轉(zhuǎn)混勻儀（15 rpm左右）孵育60 min，即為細(xì)胞上清與組分AB的混合液。

3.準(zhǔn)備磁珠:

1)      吸取0.2 mL磁珠(使用前先震蕩混勻)于新的1.5 mL的離心管中，于磁力架中靜置3 min。

2)      吸棄上清液，加入1 mL的組分D磁珠清洗液，震蕩混勻，置于磁力架上靜置3min，再重復(fù)清洗一次。

4.磁珠捕獲:

1)      吸棄磁珠清洗液，取1 mL細(xì)胞上清與組分A，B的混合液加入其中，輕輕重懸磁珠，重懸后吸回離心管，于室溫?fù)u床（65 rpm左右）或者旋轉(zhuǎn)混勻儀（25 rpm左右）孵育60 min；

5.磁珠捕獲后清洗:

 1)      向上步驟的磁珠沉淀加入組分E外泌體清洗液1 mL，于磁力架上靜置3 min，吸棄上清液清洗，重復(fù)清洗兩次。

 2)    吸棄上清后，向管中加入20 μL PBS，震蕩后的溶液即為含有外泌體的磁珠溶液，可保存于-80 °C的冰箱中，以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)

1．為了您的自身安全，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)做好有效防護(hù)。

2．清洗后獲得的為磁珠-外泌體的復(fù)合體，可直接裂解用于下游蛋白分析，但其他表征如NTA或TEM 分析會(huì)受到影響。

3．本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)！